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15

2021

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酶聯免疫吸附法(ELISA)試驗小常識

所屬分類:


一、平衡:
  操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

  二、加樣:
  1、標本為血清:最好將血液先自然存放l-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;
  2、標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時間后,3000rmp離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內;
  3、加樣后及時放入孵箱,加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干;
  4、定期校驗移液器,移液器與槍頭要配套,移液不宜太快,排放要完全,槍頭最好一次性使用;
  5、標本較多時,應分批操作。

  三、孵育:
  1、貼封片或加蓋;
  2、用定時鐘準確計時;
  3、定期校驗恒溫箱;
  4、在振蕩器上充分混勻再放入恒溫箱。

  四、洗板:
  1、保證洗液注滿各孔,但不要溢出,洗板針暢通,洗完板后最好在吸水紙(選擇干凈,無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;
  2、合理安排,或多用幾臺洗板機;
  3、配洗液應使用純凈的蒸餾水,并防止被污染。

  五、顯色:
  1、顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用;
  2、加樣時保持顯色劑不外流。

  六、終止:
  加終止液時應避免產成氣泡。

  七、讀板:
  1、清潔酶標板;
  2、定期校驗酶標儀,TMB顯色使用450nm波長。

  八、全過程:
  1、盡量使用移液器加液,如用滴瓶應保證滴瓶垂直向下,持力均勻,滴速不宜過快,每孔一滴;
  2、孵育的時間和溫度應嚴格控制,嚴格按說明書操作;
  3、不同批號、不同品種的試劑組份不能交叉使用;
  4、試劑盒應在4~8℃儲存,不要長時間置于常溫下或反復凍融,用剩的試劑應把瓶子蓋好,板條放在密實袋內,保存在合適的環境中,盡快用完。

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